Tyteca, DonatienneDe Bueger, MarineMarineDe Bueger2025-05-142025-05-142025-05-142024https://hdl.handle.net/2078.2/36675La membrane du globule rouge (GR) présente des domaines lipidiques submicrométriques stables associés à la fois aux zones de haute et basse courbure. Ils contiennent tous du cholestérol mais ceux présents en basse courbure sont également enrichis en ganglioside GM1 ou en sphingomyéline. Ces domaines pourraient contribuer au processus de déformation du GR en recrutant et/ou activant des protéines membranaires. Mon mémoire vise à étudier le rôle des domaines enrichis en cholestérol dans la distribution du transporteur facilité du glucose, GLUT1. Cette hypothèse est soutenue par les observations que (i) GLUT1 semble former des clusters à la surface de cellules nucléées, (ii) l’évolution du contenu en ATP est similaire à celle de l’abondance des domaines enrichis en cholestérol durant les 6 premières semaines du stockage des concentrés érythrocytaires à 4°C et, (iii) GLUT1 est associé à la stomatine, une protéine connue pour être liée au cholestérol, aussi bien à la surface des cellules nucléées que des GRs. Pour adresser cette question, nous avons commencé par étudier la répartition de GLUT1 à la surface du GR par immunomarquage. Nos résultats montrent que ce transporteur se répartit sous forme de clusters submicrométriques et que ceux-ci sont présents aussi bien en haute qu’en basse courbure, tout comme les domaines lipidiques. D’autre part, la proportion des petits clusters augmente de façon réversible lors d’une incubation prolongée dans un milieu sans glucose, laissant suggérer que ce clustering pourrait jouer un rôle à la surface des GRs. Un double marquage aurait permis de tester si les domaines lipidiques et les clusters de GLUT1 sont associés spatialement mais c’est techniquement irréalisable. Nous avons donc contourné cette difficulté en déterminant l’association entre GLUT1 et la stomatine. Nous avons pu ainsi montrer que GLUT1 s’associe partiellement avec la stomatine en haute et basse courbure. Ayant en parallèle montré par imagerie confocale vitale la colocalisation partielle entre le cholestérol (révélé par le fragment de la toxine Thêta couplé à mCherry) et la stomatine sur des cellules nucléées exprimant transitoirement la stomatine couplée à la GFP, ces résultats suggèrent une association partielle entre GLUT1 et le cholestérol. Afin d’étudier de manière plus approfondie cette association, nous avons ensuite déterminé la distribution des clusters de GLUT1 en déplétant partiellement le contenu en cholestérol membranaire. Nous avons observé une augmentation de la taille des clusters et leur disparition de la zone de basse courbure, deux effets réversibles après réplétion en cholestérol. Nous avons enfin évalué si la diminution de l’abondance des domaines enrichis en cholestérol à la surface des GRs et l’association du cholestérol aux vésicules extracellulaires au cours du stockage à 4°C dans des tubes de sang total et des concentrés érythrocytaires s’accompagnait d’une perte de GLUT1 et de stomatine. Que ce soit dans les tubes ou dans les concentrés, le cholestérol, la stomatine et GLUT1 sont enrichis dans des spicules membranaires et des vésicules extracellulaires. En conclusion, GLUT1 forme des clusters submicrométriques dont la taille dépend du contenu extracellulaire en glucose et, dont la taille et la distribution en basse vs haute courbure dépendent du contenu membranaire en cholestérol. De plus, GLUT1 s’associe partiellement avec la stomatine et cette association est diminuée au cours du stockage de GRs au profit des vésicules extracellulaires également enrichies en cholestérol. L’ensemble des résultats obtenus durant ce mémoire indiquent le rôle du cholestérol membranaire dans le clustering de GLUT1 à la surface du GR mais il reste à évaluer si ceci implique le contenu en cholestérol ou sa distribution en domaines.Globule rougeMembrane plasmiqueCholestérolGLUT1StomatineDomaines lipidiquesMicroscopie confocaletext::thesis::master thesisthesis:44259