De Smet, CharlesJaouart, MouniaMouniaJaouart2025-05-142025-05-142025-05-142021https://hdl.handle.net/2078.2/25180Le développement tumoral fait suite à des altérations génétiques et/ou à des altérations de l’expression des gènes dans la cellule. Celles-ci permettent aux cellules d’acquérir des propriétés malignes telles que la prolifération incontrôlée, l’inhibition de l’apoptose, ou encore l’induction de l’angiogenèse. Le laboratoire d’accueil s’intéresse à un groupe de gènes nommés « gènes cancer-lignée germinale » (CG). Ces gènes ont la particularité d’avoir une expression normalement restreinte aux cellules germinales. Dans un contexte tumoral, ils sont activés de manière aberrante suite à la déméthylation de leur promoteur. Grâce à leur spécificité tissulaire, les gènes CG sont intéressants à étudier car ils présentent une opportunité pour des thérapies ciblés. En interrogeant l’ensemble du transcriptome et du méthylome de poumon normal et de lignées de cancer du poumon, le laboratoire d’accueil a identifié un transcrit alternatif du gène AGO1. Celui-ci présente un profil de type CG, puisqu’il est exprimé exclusivement dans le testicule et montre une déméthylation corrélée à une activation aberrante dans des lignées de cancer du poumon. Sur base d’algorithmes de prédictions de cadre ouvert de lecture, ce transcrit alternatif, baptisé CT-AGO1, pourrait produire une forme tronquée de la protéine AGO1. AGO1 exerce un rôle important dans le processus d’interférence ARN dans les cellules. En se basant sur ces données, notre hypothèse est que le variant CT-AGO1 pourrait contribuer à la progression tumorale en modifiant ce système de régulation. Les objectifs de notre travail sont, de confirmer le rôle de la méthylation de l’ADN sur la régulation transcriptionnelle de CT-AGO1, de confirmer son activation dans une série de tumeurs in vivo et de vérifier sa capacité de conduire à la synthèse d’une protéine. Nous avons d’abord démontré le rôle de la méthylation de l’ADN sur la régulation transcriptionnelle de CT-AGO1 par des expériences d’induction avec un agent déméthylant dans différentes lignées cellulaires. Ensuite, l’analyse de données fournies par le projet TCGA (The Cancer Genome Atlas) a révélé une fréquence importante d’activation de CT-AGO1, corrélée de manière significative à la déméthylation de son promoteur, dans plusieurs types de tumeurs, tel que les cancers du poumon, de la tête et du cou, de l’œsophage, et de l’estomac. Enfin, dans le but de déterminer si l’ARNm de CT-AGO1 est traduit en protéine, nous avons surexprimé l’ADNc correspondant dans la lignée cellulaire HEK293T. L’analyse par Western blot avec un anticorps dirigé contre la portion C-terminale d’AGO1 a révélé trois protéines de tailles différentes. Ce résultat démontre donc que CT-AGO1 produit des formes tronquées de la protéine AGO1. Pour conclure, nous avons démontré que CT-AGO1 est un gène de type CG et qu’il est activé de manière aberrante in vivo dans une variété de types tumoraux suite à la déméthylation de son promoteur. Ce transcrit code pour des formes tronquées de la protéine AGO1, dont le(s) rôle(s) reste(nt) à investiguer.EpigénétiqueGènes "Cancer-Germline"CancerMéthylationtext::thesis::master thesisthesis:33255