Greet KerckhofsDelia HoffmannCondila, AuraAuraCondila2025-05-142025-05-142025-05-142023https://hdl.handle.net/2078.2/31317L’histologie en trois dimensions (3D) est un domaine qui suscite un intérêt croissant. Grâce à la technique de microtomographie à rayons X (µCT), il est possible d’atteindre des résolutions spatiales inférieures à 1 µm. En recherche biomédicale, cette technique est largement utilisée pour analyser les tissus calcifiés (p.ex. l’os). Cependant, les tissus mous ne sont pas visibles naturellement en µCT. Classiquement ces tissus sont marqués grâce à des agents de contraste. On parle alors de microtomographie à rayons X à contrastes améliorés (MTCA). Le Lugol par exemple marque de manière générale certaines structures comme le tissu sanguin, le tissu nerveux, le tissu musculaire, le tissu cartilagineux et le tissu adipeux sans pour autant faire la distinction entre les différents types cellulaires présents dans ces tissus ce qui serait possible grâce à des anticorps. Le but de mon mémoire est de transposer l’immunomarquage réalisé sur coupe à un immunomarquage sur tissu entier compatible avec la MTCA. Pour ce faire, il va falloir affronter trois problématiques. La première problématique concerne le fait que les anticorps ne sont plus déposés sur la lame, mais doivent traverser les différentes couches du tissu entier. Afin d’obtenir une pénétration optimale des anticorps, différentes techniques de perméabilisation du tissu ont été testées en utilisant différents détergents. La deuxième problématique concerne les agents de révélation. Les chromogènes utilisés classiquement sur coupe pour révéler les immunomarquages sont invisibles pour les rayons X. Nous avons cherché des agents de révélation atténuant les rayons X, c’est-à-dire des molécules qui contiennent des atomes à grand nombre atomique. Plusieurs molécules ont été trouvées. Pour chacune, une validation sur coupe en microscopie à champ clair et une validation en radiographie ont été réalisées. Une fois ces validations obtenues, l’immunomarquage a été réalisé sur tissu entier afin d’être visualisé en MTCA. Finalement, il est nécessaire d’ajouter un marquage général du tissu, comparable à une coloration à l’hématoxyline sur coupe. Pour cela, le marquage avec les agents de contraste CA4+ (agent de contraste iodé et cationique) et Hf-WD POM (polyoxométalate de Wells-Dawson à base de hafnium) ont été mis au point. En conclusion, ce mémoire a mis en évidence la compatibilité de l’immunohistologie sur tissu entier avec la MTCA et a permis d’améliorer plusieurs étapes des protocoles expérimentaux.3DImmunostainingµCTtext::thesis::master thesisthesis:38887